这次读的是上一篇的研究基础，关于FAM3D在腹主动脉瘤中的作用。这是2018年孔炜组发的文章，令人惊讶的是付毅老师是这篇的一作

(相关资料图)

放个DOI：.311289

炎症细胞浸润是腹主动脉瘤的重要病理特征之一。中性粒细胞是炎症性血管疾病中第一个被募集到炎症部位的细胞群。内皮细胞释放的趋化因子，如CXCL8 和CXCL1，招募中性粒细胞，激活中性粒细胞粘附分子(VLA-4，Mac-1)，并引起内皮细胞和中性粒细胞之间的相互作用，从而引发血管炎症。靶向这些趋化因子可能有利于抑制中性粒细胞募集和缓解血管炎性疾病。

FAM3D (family with sequence similarity 3, member D)是细胞因子样家族，包含FAM3A、FAM3B、FAM3C和FAM3D，它们都具有一个4螺旋束结构。FAM3D蛋白由223个氨基酸组成，分子量为33 kDa。FAM3D在胃肠道中组成性表达，并且FAM3D表达和产生的调节与营养调节有关，即在小鼠和人类摄入高脂肪饮食后，FAM3D上调。

Result1：FAM3D Deficiency Attenuates the Development of AAA in Mice

第一部分在探究FAM3D与AAA可能的关系。首先进行了对FAM3D的免疫染色。在AAA患者中，FAM3D表达上调。

接着又做了WB和rt-PCR，对于弹性蛋白酶或CaPO4诱导的AAA模型，FAM3D表达均在第七天达到顶峰。

接着，设计了FAM3D敲除小鼠，弹性蛋白酶诱导AAA，结果敲除组的直径明显变小。

并且可以缓解弹性蛋白酶导致的弹性蛋白降解。

这一部分的结论是FAM3D与腹主动脉有关

Result 2: FAM3D Deficiency Reduces Neutrophil Recruitment to the Aortic Wall During AAA Formation

由于中性粒细胞和单核细胞在AAA发展的炎症病理中起着重要作用，于是接下来检测了中性粒细胞和单核细胞。

在AAA的病理进展中，浸润到主动脉壁的中性粒细胞数量随时间增加，外周血中性粒细胞数量增加。而FAM3D敲除的作用：降低中性粒细胞浸润，增加外周血中性粒细胞数量。于是FAM3D的作用：增加中性粒细胞浸润，降低外周血中性粒细胞数量。

单核细胞和巨噬细胞增多。   ///在这里对单核细胞分类检测，“high”是促炎型的，“low”是巡逻型的（？不懂） 

免疫染色证明敲除组单核细胞少

当敲除后——中性粒细胞弹性蛋白酶和蛋白酶-3的蛋白明显下调，动脉瘤组织中MMP活性和ROS的产生减少

Result3: Blockage of FAM3D by Neutralizing Antibody Ameliorates AAA Formation and Neutrophil Recruitment

这一部分评估了FAM3D中和抗体6D7的治疗效果：抑制扩张，减弱弹性蛋白降解，抑制了动脉瘤主动脉壁中性粒细胞的募集。

Result 4: FAM3D is Upregulated in ECs by Vascular Pathogenic Stimuli

通过前面的研究，已知的是FAM3D会在AAA组织中上调，于是接下来探索了FAM3D在AAA中的细胞起源

用弹性蛋白酶诱导AAA，FAM3D与内皮细胞共定位，显示表达量上调

由于中性粒细胞来源的趋化因子也参与了中性粒细胞的趋化，于是检测了中性粒细胞中的FAM3D表达，结果显示不表达   ////这里为什么要用TNF-α？使中性粒细胞表型改变？

平滑肌细胞也不分泌FAM3D

TNF-α处理人脐静脉内皮细胞，检测TNF-α表达，上升。   ///这里B是WB，C是rtPCR，E是在不同时间点检测，D是什么？文中说是“内皮细胞条件培养基”，不是很懂

Result 5：Endothelial Cell–Derived FAM3D Contributes to Neutrophil Recruitment

中性粒细胞的募集涉及到内皮细胞和中性粒细胞之间的相互作用，包括中性粒细胞捆绑、滚动、粘附到内皮细胞，以及中性粒细胞的跨内皮迁移。

不论是FAM3D抗体CD7还是敲除小鼠，都呈现中性粒细胞粘附减少。  ////这里还用到了transwell系统研究FAM3D对细胞迁移的诱导性

Result6：FAM3D Specifically Activates Mac-1 in Neutrophils

中性粒细胞的黏附和滚动依赖于选择素配体PSGL-1和CD44以及L-选择素，而中性粒细胞的黏附和转运则由整合素介导，如VLA-4和Mac1。因此，应用rtPCR检测FAM3D是否调控这些分子的表达。

于是找到了Mac-1。   ////这里的E图里面，PMA是一种Mac-1的诱导剂，用来做阳性对照

Result7: FAM3D Induces Neutrophil Recruitment via FPR-Gi Protein/β-Arrestin-Mac-1 Signaling

FAM3D的功能受体是FPR1与FPR2。在这里使用到FPR1拮抗剂CsH和FPR2拮抗剂WRW4处理，可以显著降低Mac-1表达与中性粒细胞粘附聚集。因此，FPR1和FPR2介导FAM3D诱导的Mac-1激活和中性粒细胞粘附和募集。

FPR1和FPR2是GPCR，可转导Gi蛋白和β抑制蛋白依赖信号。通过中性粒细胞FPR的Gi蛋白依赖信号触发GPCR特异性Gi亚基与Gβγ二聚体分离，随后激活PKC、AKT和ERK信号转导途径，进一步促进中性粒细胞活化。另一方面，β-arrestin-1-和β-arrestin-2相关信号下游的FPR介导中性粒细胞趋化和支架Src和p38MAPK。接下来检测了Gi蛋白依赖的信号传导。

FAM3D在5分钟瞬间诱导PKC磷酸化，并在5分钟至30分钟持续诱导ERK1/2磷酸化。////感觉ERK不太显著，或许是图的问题    Go6983(PKC抑制剂)和PD98059(ERK1/2抑制剂)，而不是MK-2206(AKT抑制剂)，阻断了FAM3D诱导的Mac-1激活，表明PKC和ERK1/2参与Gi蛋白依赖的信号通路，介导FAM3D在中性粒细胞中的作用。

接下来还有Src和MAPK。FAM3D在15分钟瞬间诱导Src磷酸化，在5分钟瞬间诱导p38MAPK在中性粒细胞中激活。此外，p38MAPK抑制剂SB203580和Src抑制剂AZD0530都能显著阻断FAM3D激活的Mac-1，这意味着FAM3D还能激活p38MAPK-和Src相关的β-抑制蛋白依赖信号，诱导Mac-1激活

体内条件，FAM3D缺乏抑制gi蛋白依赖性PKC和ERK1/2磷酸化，以及β-抑制蛋白依赖性Src和p38MAPK激活。

因此，FAM3D在AAA形成过程中通过FPR1/2-Gi蛋白/β-arrestin-Mac-1信号传导导致中性粒细胞募集。

用文章中的图做一个总结，TNFα、LPS、OSS刺激内皮细胞分泌FAM3D，作用于中性粒细胞上的FPR1/2受体，通过G蛋白途径磷酸化PKC、ERK，或通过β-arrestin磷酸化Src、MAPK，激活Mac-1，诱导中性粒细胞募集。

Discussion

CXCR1/2的配体是否也可作为AAA的靶点？

FAM3D也可激活单核细胞中的Mac-1

FAM3D对中性粒细胞的募集作用早于单核细胞/巨噬细胞

由于中性粒细胞能够进一步调节炎症部位单核细胞/巨噬细胞的积累，因此FAM3D缺陷抑制单核细胞/巨噬细胞募集也可能部分依赖于中性粒细胞浸润的抑制。

FAM3A-C对EC功能的调控作用有待进一步研究

这篇大概就读到这里了，打算再找篇综述读读

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